内切-β-1,4-葡聚糖酶
2020-01-07

内切-β-1,4-葡聚糖酶

本发明涉及内切-β-1,4-葡聚糖酶,更具体地涉及具有内切-β-1,4-葡聚糖酶活性(EC?3.2.1.4)的酶在去污剂和纺织应用中的用途,所述酶选自以下之一:a)由SEQ?ID?NO:1中第1到2322位DNA序列编码的多肽;b)通过培养包含SEQ?ID?NO:1序列的细胞而产生的多肽,所述培养在该DNA序列得以表达的条件下进行;c)具有如下序列的内切-β-1,4-葡聚糖酶,该序列与SEQ?ID?NO:2第1到773位氨基酸序列和其具有内切-β-1,4-葡聚糖酶活性的片段有至少97%同一性;和d)具有内切-β-1,4-葡聚糖酶活性的多肽,所述多肽由与SEQ?ID?NO:1第1到2322位中所示核苷酸序列杂交的多核苷酸编码。

50 0.82

-用于滤水:造纸纸浆的滤水能力可通过用水解酶处理纸浆而得到提高。应用本发明酶或酶组合物可能更为有效,例如可导致更高程度地松散细小部分中的强水合微纤维束一一正是此微纤维束可通过在纤维间以及在造纸机器的丝网中阻塞空洞而限制滤水速度。

芽孢杆菌属种ΑΑ349菌株分离自源于希腊的土壤样本,其由本发明人根据国际承认用于专利程序的微生物保藏的布达佩斯条约于1999年I月25日保藏在德意志微生物保藏中心(DeutscheSammlungvonMikroorganismenundZellkulturenGmbH,MascheroderWeglb,D-38124Braunschweig,联邦德国),保藏号为DSM12648。

与不用内切-葡聚糖酶洗涤的结果相比,内切-葡聚糖酶洗涤后污染样本的反射值增加,这说明内切-葡聚糖酶增加了污物从织物上的去除。此外,内切-葡聚糖酶可降低污物的再沉积,这可由内切-葡聚糖酶洗涤后清洁样本的反射值增加所证实。内切-葡聚糖酶对污物去除和抗再沉积作用的改进在加入漂白剂后基本未发生变化。

ECU方法中测定酶样本减小羧甲基纤维素(CMC)溶液粘度的能力,且结果以ECU给出。粘度的减小与内切-纤维素酶活性成正比。条件:7LFD型CMC来自Hercules,于0.1M磷酸盐缓冲液中,pH7.5;CMC浓度为每升反应物31.1g;在40°C反应30分钟。用振动粘度计测定粘度,所述粘度计如MIVI3000,Sofraser,法国。

溶液 pH:10.0

实施例13

本体(Bulk)溶液包含:(a)如以上实施例2中描述的于缓冲液中的实施例2的内切-葡聚糖酶,浓度为6.12CMCU/ml以及4.9CMCU/g织物;以及(b)热稳定果胶酸裂解酶,浓度为1.93mv-mol/ml/min。按实施例10中所述浸乳样本并进行处理。织物的吸湿率为80%。处理条件为pH9.2、90°C、相对湿度(RH)100%,并且处理90分钟。

然后用Q-Sepharose阴离子交换层析进行进一步的纯化。将来自超滤的溶液加载到含Q-Sepharose(Pharmacia)的300ml柱子上,所述Q-Sepharose柱已用25mmol的Tris(pH8.0)进行过平衡。内切-葡聚糖酶与Q-Sepharose结合,然后用0.5M的NaCl梯度洗脱。合并具有高内切-葡聚糖酶活性的级分。最终的合并内切-葡聚糖酶溶液的内切-葡聚糖酶活性为大约每毫升1000ECU。

本发明进一步提供了来自不同细菌菌株的多肽和多核苷酸对应物(直向同系物(ortholog)或共生同系物(paralog))。特别有意义的是来自革兰氏阳性嗜碱菌株,包括芽孢杆菌属种的内切葡聚糖酶多肽。

进行以下的实验以评估实施例2中获得的内切-葡聚糖酶在煮炼和生物抛光联合中的效果。